Студопедия — Простые и сложные методы окраски

Методы окраски бактерий микробиология

Окрашивание мазка. Окрашивание бактерий. Специальные методы окраски бактерий. Окраска бактерий по Граму. Дифференцирующие методы окрашивания.

Стандартные красители, используемые для, окраски бактерий, — карболовый фуксин Циля, фуксин Пфайффера и метиленовый синий по Лёффлеру. Для получения более информативных результатов в светооптической микроскопии используют специальные и дифференцирующие методы окраски.

Специальные методы окраски бактерий

Наибольшее распространение нашли методы окраски Грама и Циля-Нильсена (рис. 11-11).

Дифференцирующие методы окрашивания обычно применяют для окрашивания различных морфологических структур.

Окраска капсул бактерий

Для окраски капсул бактерий применяют методы Хисса, Лёйфсона и Антони; последний метод наиболее прост и включает окраску кристаллическим фиолетовым с последующей обработкой 20% водным раствором CuS04.

Окраска жгутиков бактерий

Для окраски жгутиков бактерий предложены методы Лёффлера, Бёйли, Грея и др. Для этих методов характерны первоначальное протравливание препарата [обычно растворами таннина, HgCl2ъ и последующая окраска (чаще карболовый фуксин Циля).

Окраска спор бактерий

Окраску спор бактерий проводят после предварительной обработки их стенок. Наиболее прост метод Пешкова, включающий кипячение мазка с синькой Лёффлера на предметном стекле с последующей докраскои нейтральным красным. Споры окрашиваются в синий цвет, вегетативные клетки — в розовый.

7. Простые и сложные методы окраски

Простой метод окраски. Является одноэтапным и заключается в окраске микропрепарата одним красителем. Используют основные анилиновые красители, такие как, фуксин, генцианвиолет, метиленовый синий в виде водных растворов или пропитанных красителем фильтровальных бумажек, которые помещают на мазок и смачивают водой. Продолжительность окраски составляет 3-5 минут, после чего микропрепарат промывают водой, высушивают и микроскопируют. В препаратах, окрашенных простым методом, можно получить представление о форме, расположении и размерах микробных клеток.

Читайте также:  5 причин бруксизма или почему ваш ребенок скрипит зубами - #LIFE INCAMP

Сложные методы окраски. Сложные (дифференцирующие) методы окраски (по Граму, Цилю-Нильсену и др.) включают последовательное использование нескольких красителей и дополнительных способов обработки препаратов. Эти методы позволяют дифференцировать бактерии в зависимости от строения их структур, чаще всего поверхностных. Например, метод окраски по Граму позволяет дифференцировать бактерии по строению их клеточной стенки: грамположительные (фиолетовые) с толстой и грамотрицательные (красные) бактерии с тонкой клеточной стенкой.

Существуют специальные сложные методы окраски, которые используют для выявления структурных компонентов бактериальной клетки: капсул, цитоплазматических включений, спор, жгутиков.

8. Механизмы окрасок по Граму и Цилю-Нильсену

Метод Грама. Относится к сложным методам окраски и позволяет дифференцировать грамположительные и грамотрицательные бактерии, что является важным таксономическим признаком. Результат окраски определяется особенностями строения клеточной стенки бактерий. При окраске генцианвиолетом и последующем воздействии раствора Люголя образуется комплексное соединение генцианвиолета и йода с пептидогликаном, которое при дифференциации спиртом удерживается в клетках грамположительных бактерий, имеющий многослойный пептидогликан и вымывается из грамотрицательных бактерий, имеющих тонкий слой пептидогликана. При дополнительной окраске водным раствором фуксина грамотрицательные бактерии приобретают красный цвет.

Таблица 4. Метод Грама

На фиксированный мазок поместить фильтровальную бумажку, пропитанную генцианвиолетом, смочить водой, 2-3 минуты

Все бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет

Снять бумажку, слить с препарата оставшуюся краску и налить раствор Люголя на 1 минуту

Все бактерии остаются фиолетовыми

Для дифференцирования нанести на мазок этиловый спирт и обесцветить в течение 30-60 с, промыть водой

Грамположительные бактерии остаются фиолетовыми, грамотрицательные обесцвечиваются

Нанести фуксин Пффейфера (водный раствор фуксина) и докрасить 1-2 мин, промыть водой, высушить

Грамположительные остаются фиолетовыми, грамотрицательные окрашиваются в красный цвет

Метод Циля-Нильсена. Относится к сложным методам окраски и позволяет дифференцировать кислотоустойчивые и некислотоустойчивые бактерии.

Читайте также:  Что регулирует наше общение Основные этические нормы и принципы общения

Таблица 5. Метод Циля-Нильсена

На фиксированный мазок нанести карболовый раствор фуксина Циля через полоску фильтровальной бумаги и подогреть препарат в пламени горелки до появления паров (повторить 3-4 раза)

Все бактерии окрашиваются в красный цвет

Снять бумагу, промыть мазок водой

Все бактерии остаются красными

Для дифференцирования нанести 5% раствор серной кислоты на 1-2 минуты

Кислотоустойчивые бактерии остаются красными, некислотоустойчивые обесцвечиваются

Нанести водный раствор метиленового синего и докрасить 3-5 мин, промыть водой, высушить

Кислотоустойчивые остаются красными, некислотоустойчивые окрашиваются в синий цвет

Кислотоустойчивые бактерии имеют особое строение клеточной стенки, содержащей большое количество сложных липидов (миколовых кислот, восков, глико- и фосфолипидов), что делает эти бактерии кислото-, щелоче- и спиртоустойчивыми. Клеточная стенка этих бактерий плохо воспринимает анилиновые красители и обычные способы окраски. Высокая температура в процессе окраски методом Циля-Нильсена расплавляет липиды, фенол разрыхляет клеточную стенку и краситель проникает внутрь клетки. После остывания препарата липиды вновь затвердевают, прочно удерживая краситель, поэтому кислотоустойчивые бактерии не обесцвечиваются серной кислотой и остаются красными. Некислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются и их докрашивают контрастным красителем – метиленовым синим. В основном, метод используется для окраски бактерий, относящихся к роду Mycobacterium (M.leprae, M.tuberculosis, M,bovis и др.)

Методы окраски бактерий микробиология

Окр а ска микроорган и змов, один из широко применяемых методов микробиологической техники, заключающийся в окраске фиксированных клеток микроорганизмов специальными красителями. Вначале в каплю воды, находящуюся на предметном или покровном стекле, наносят петлей клетки микроорганизмов. После высушивания взвеси клеток препарат фиксируют специальными фиксирующими жидкостями. Для выяснения морфологии клеток их окрашивают спиртовыми растворами основных (метиленовый синий, генциановый фиолетовый, фуксин) или кислых (эритрозин, эозин) красителей. Существуют специальные методы окраски спор или жгутиков у бактерий, а также слизистых капсул у некоторых микроорганизмов. Очень распространена окраска по Граму, имеющая диагностическое значение (см. Грама метод). Кокковые и спороносные формы бактерий, а также дрожжей — грамположительны и окрашиваются в синий цвет, многие неспороносные бактерии — грамотрицательны и окрашиваются в красный цвет.

Читайте также:  Корвалол форте» инструкция, состав, лечение и цены в 2020 году

Некоторые красители или химические реактивы применяют для микроскопического химического анализа, т. е. обнаружения в клетках определённых органических веществ. Так, содержащиеся в клетках липиды окрашиваются осмиевой кислотой в чёрный, а суданом в красный цвет; метахроматин выпадает в вакуолях в виде красных зёрен при окраске нейтральным красным; раствор Люголя окрашивает крахмал в коричневый, а гранулёзу в синий цвет. Кислотоустойчивые бактерии (например, микобактерии, в частности вызывающие туберкулёз у человека и животных, а также возбудитель проказы) после окраски их фуксином в красный цвет не обесцвечиваются раствором серной кислоты. Весьма распространено витальное, т. е. прижизненное окрашивание нефиксированных клеток микроорганизмов. Употребление флюоресцентных красителей (например, акридинового оранжевого) в сочетании с люминесцентной микроскопией позволяет различать живые и мёртвые клетки микроорганизмов: первые окрашиваются в зелёный, вторые — в красный цвет.

Широкое распространение получили флюоресцентные красители, соединённые с сывороткой, содержащей антитела против микроба определённого вида. При люминесцентной микроскопии свечением обладают лишь клетки этого вида. Таким образом можно без посевов на питательной среде быстро установить вид болезнетворного микроба, содержащегося в кишечнике, крови или мокроте больного, а также виды микроорганизмов, присутствующих в почве.

Ссылка на основную публикацию
Строение скелета человека в таблице (8 класс, биология)
Названия частей человеческого тела на английском Сегодня у нас вдвойне важная тема: мы изучаем английский и изучаем себя. Представьте ситуацию:...
Стресс и щитовидная железа — Какая связь Что делать
Щитовидная железа и репродуктивное здоровье женщины Эндокринная система в организме, как оркестр, где эндокринные клетки, продуцирующие различные гормоны, как инструменты,...
Стресс, питание и цистит в чем взаимосвязь Отвечает уролог
Психосоматика цистита. Причины и лечение у женщин Цистит – это болезнь, возникающая из-за воспаления мочеполовой системы человека, вследствие распространения болезнетворных...
Строение толстой и прямой кишки
Аденокарцинома Аденокарциномами называют злокачественные опухоли, которые развиваются из железистых клеток. Они могут возникать в разных органах. Злокачественные опухоли легких в...
Adblock detector